PCR ανάλυση: τι είναι αυτό; Πώς να πάρετε την ανάλυση PCR

Δεν έχει περάσει πολύς καιρός αναπτύξει μια αξιόπιστη, εξαιρετικά ευαίσθητη και γρήγορη μέθοδος για τη διάγνωση διαφόρων μολυσματικών ασθενειών στον άνθρωπο. Μία τέτοια μέθοδος ονομάζεται «ανάλυση PCR». Τι είναι, ποια είναι η ουσία του, αυτό που μπορεί να προσδιορίσει τους μικροοργανισμούς και πώς να το πάρει, θα περιγράψουμε σε αυτό το άρθρο.

Η ιστορία της ανακάλυψης

Εφηύρε την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) είναι ένας Αμερικανός επιστήμονας Cary Myullis το 1983. Αρχικά, η πατενταρισμένη μέθοδο διάγνωσης της εταιρείας «Cetus Corporation», στην οποία εργάστηκε και ο δημιουργός του. Αλλά το 1992 όλα τα δικαιώματα και τα διπλώματα ευρεσιτεχνίας πωλήθηκαν στην εταιρεία «Hoffman-La Roche.» Μετά από αυτό, αποδείχθηκε ότι παρόμοιες μελέτες διεξήχθησαν παράλληλα και αναφέρθηκαν από άλλους βιολόγους των ΗΠΑ, όπως η Ηλεία Chen, David Edgar, John ΚΚΕ. Το 1980 ασχολήθηκε με το θέμα αυτό και οι σοβιετικοί επιστήμονες Α Slyusarenko Α Kaledin και Σ Gorodetsky. Ως εκ τούτου, για να καθοριστεί ο μοναδικός κάτοχος των πνευματικών δικαιωμάτων δεν κατέστη δυνατό. Πολλοί εξαιρετική βιοχημικοί έχουν συμβάλει στην ανάπτυξη των μεθόδων αντίδρασης πολυμεράσης και CERN κατοχυρωμένη με δίπλωμα ευρεσιτεχνίας καινοτομίες τους. Σε αυτήν την ανάλυση το σημείο της PCR διεξάγεται καθ 'όλη τη ειδικά εξοπλισμένα εργαστήρια.

ΠΕΡΙΛΗΨΗ Διαγνωστική PCR

PCR ανάλυση: τι είναι και πώς λειτουργεί; Η ουσία της μεθόδου έγκειται στο γεγονός ότι με τη χρήση ενός ειδικού ενζύμου DNA πολυμεράσης in vitro για την αύξηση του όγκου ειδική μικροβιακή περιβάλλον. Για να γίνει αυτό, επανειλημμένα πολλαπλασιάστε το υπάρχον υλικό DNA. Έτσι, η παρουσία ενός παθογόνου σε ένα δείγμα, το ποσό θα αυξηθεί σε βάρος των βιοχημικών εργαστηριακών χειραγώγησης, και τα βακτηρίδια δεν θα είναι δύσκολο να ανιχνευθούν στο μικροσκόπιο.

Πώς είναι η μελέτη του υλικού;

Για τη διεξαγωγή της ανάλυσης που απαιτούνται:

• Η μήτρα DNA?
• εκκινητές υλικό που συνδέει τα άκρα του θραύσματος?
• θερμοσταθερό ένζυμο DNA πολυμεράση?
• χημικές ουσίες, εξασφαλίζει την ορθή λειτουργία των ενζύμων?
• ρυθμιστικό διάλυμα απαιτείται για τη δημιουργία των κατάλληλων συνθηκών για την ανάπτυξη και την ανάπτυξη του υλικού DNA.

Για την εκτέλεση της PCR λειτουργούν 25-30 επαναλήψεις που αποτελείται από τρία στάδια: μετουσίωση, ανόπτηση και επιμήκυνση.

Για την ανάλυση polimezarnoy αλυσιδωτή αντίδραση χρησιμοποιώντας μια ειδική συσκευή - ένα ανακυκλωτή. Ο σύγχρονος εξοπλισμός επιτρέπει να εγκαταστήσετε το απαραίτητο σωλήνες θέρμανσης και ψύξης του προγράμματος για την εξάλειψη των λαθών κατά τη διάρκεια της διάγνωσης.

Πού να ισχύει η διάγνωση;

Polimezarnoy μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης χρησιμοποιούνται σε διάφορα πεδία της ιατρικής:

• εγκληματολόγοι το χρησιμοποιούν για να προσδιορίσει το γενετικό υλικό, όπως τα μαλλιά, το σάλιο ή αίμα?
• PCR ανάλυση του αίματος βοηθά στην γονοτύπησης, π.χ. για την ανίχνευση των μεμονωμένων γενετικών δεσμεύθηκε αντιδράσεις σε ορισμένα φάρμακα?
• χρησιμοποιώντας αυτή τη μέθοδο αποκαλύπτει την παρουσία των οικογενειακών δεσμών μεταξύ των ανθρώπων?
• sought-PCR μέθοδος έχει γίνει στην ιατρική διάγνωση για τον προσδιορισμό των διαφόρων μολυσματικών ασθενειών.

Τι λοιμώξεις αποκαλύπτει PCR;

Έτσι, το φάρμακο έχει χρησιμοποιηθεί από καιρό επιτυχώς PCR ανάλυση. Τι είναι αυτό, έχουμε ήδη μάθει. Και μερικά παθογόνα μπορεί να ανιχνευθεί με αυτό; PCR διαγνωστεί ακόλουθες μολύνσεις :

• ηπατίτιδας Α, Β, Γ?
• ureaplasmosis?
• καντιντίαση?
• χλαμύδια?
• μυκοπλάσμωση?
• βακτηριακή κολπίτιδα?
• λοιμώδης μονοπυρήνωση?
• τριχομονάδες?
• HPV λοίμωξη?
• φυματίωση?
• λοίμωξης από τον ιό του 1ου και 2ου τύπου?
• Helicobacter pylori λοίμωξη?
• κυτταρομεγαλοϊό?
• διφθερίτιδας?
• σαλμονέλωση?
• μόλυνσης από HIV.

Επίσης, οι μέθοδοι PCR που χρησιμοποιείται στη διάγνωση του καρκίνου.

πλεονεκτήματα της μεθόδου

Διαγνωστική PCR έχει αρκετά πλεονεκτήματα:

1. Υψηλή ευαισθησία. Ακόμα κι αν έχετε μόνο μερικά μόρια του DNA της ανάλυσης μικροοργανισμού της PCR ανιχνεύει την παρουσία μόλυνσης. Βοηθά μέθοδος για χρόνιες και λανθάνουσες ασθένειες που εμφανίζονται. Συχνά, σε τέτοιες περιπτώσεις, ο μικροοργανισμός είναι ακαλλιέργητη και με άλλους τρόπους.
2. Προκειμένου να διερευνηθεί οποιοδήποτε κατάλληλο υλικό, όπως είναι το σάλιο, το αίμα, σεξουαλική επιλογή, τα μαλλιά, τα επιθηλιακά κύτταρα. Η πιο κοινή είναι ένα τεστ αίματος και ουρογεννητικό μάκτρο PCR.

3. Δεν απαιτείται εκτεταμένη αναπτυσσόμενες καλλιέργειες. Η αυτοματοποιημένη διαδικασία της διάγνωσης επιτρέπει να επιτευχθούν τα αποτελέσματα μιας μελέτης μετά από 4-5 ώρες.
4. Η μέθοδος είναι σχεδόν εντελώς αυθεντικά. Καταγράφεται μόνο μεμονωμένες περιπτώσεις ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα.
5. Δυνατότητα να προσδιορίσει διάφορους τύπους παθογόνων σε ένα υλικό δείγματος. Αυτό όχι μόνο επιταχύνει τη διαδικασία της διάγνωσης της νόσου, αλλά και μειώνει σημαντικά το κόστος υλικών. Συχνά, ο γιατρός συνταγογραφεί μια ολοκληρωμένη ανάλυση της PCR. καταγραφή των τιμών, που αποτελείται από τον προσδιορισμό των έξι παθογόνα, είναι περίπου 1.500 ρούβλια.

Συστάσεις σχετικά με την προετοιμασία για ανάλυση

Τα αποτελέσματα να είναι έγκυρα τα PCR μελέτες πρέπει να ελεγχθεί, σύμφωνα με τις συστάσεις των προκαταρκτικών προετοιμασίες για τη διάγνωση:

1. Πριν από κάθε σάλιου θα πρέπει να απέχουν από το φαγητό και φάρμακα 4 ώρες πριν την λήψη του υλικού. Αμέσως πριν από τη διαδικασία, ξεπλύνετε το στόμα σας με βραστό νερό.
2. Οι παραπάνω κανόνες πρέπει να καθοδηγείται από, και κατά τη λήψη του δείγματος από το εσωτερικό του μάγουλου. Μετά το ξέπλυμα συνιστάται να πραγματοποιήσει ένα ελαφρύ μασάζ στο δέρμα για να απελευθερώσει προστάτη εκκρίσεις.
3. Τα ούρα είναι συνήθως συγκεντρώνονται στο σπίτι. Για να το κάνετε αυτό, θα πρέπει να προβεί σε λεπτομερή τουαλέτα των γεννητικών οργάνων. Σε ένα αποστειρωμένο πλαστικό δοχείο πρέπει να συλλέξει 50-60 ml ούρων. Είναι συνιστάται για τις γυναίκες να εισάγετε το ταμπόν εντός του κόλπου, και οι άνδρες όσο το δυνατόν περισσότερο για να τραβήξει το δέρμα φορές για να διασφαλιστεί η καθαρότητα του υλικού. Δεν μπορείτε να πάρετε το υλικό κατά τη διάρκεια της εμμηνορρυσίας.
4. Για την παράδοση του σπέρματος που απαιτείται να απέχουν από τη σεξουαλική επαφή για 3 ημέρες πριν από τη συλλογή του υλικού. Επίσης, οι γιατροί καλούνται να εγκαταλείψουν τη χρήση της σάουνας και ζεστό μπάνιο, το αλκοόλ και τα πικάντικα τρόφιμα. Για 3 ώρες πριν από την ανάλυση είναι απαραίτητο να απέχουν από την ούρηση.
5. Για να περάσει το ουρογεννητικό επίχρισμα, για παράδειγμα, αν η ανάλυση σε χλαμύδια PCR, τόσο οι γυναίκες όσο και οι άνδρες συνιστάται η σεξουαλική υπόλοιπο για 3 ημέρες. 2 εβδομάδες πριν την ανάλυση δεν μπορεί να λάβει αντιβιοτικά. Για μια εβδομάδα, θα πρέπει να σταματήσουν να χρησιμοποιούν το οικείο γέλες, αλοιφές, κολπικά υπόθετα, douching. 3 ώρες πριν από τη μελέτη πρέπει να απέχουν από την ούρηση. Κατά τη διάρκεια υλικό φράχτη έμμηνο ρύση δεν πραγματοποιείται, μόνο 3 ημέρες μετά την λήξη της κηλίδωσης μπορεί να πάρει ουρογεννητικού επίχρισμα.

PCR κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης

Η περίοδος αναμονής για ένα μωρό, πολλές μολυσματικές ασθένειες, τα σεξουαλικώς μεταδιδόμενα νοσήματα, είναι εξαιρετικά επικίνδυνες για τη φυσιολογική ανάπτυξη του εμβρύου. ΣΜΝ μπορεί να προκαλέσει ενδομήτρια ανάπτυξη, αποβολή ή πρόωρο τοκετό, συγγενείς δυσπλασίες του παιδιού. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να πάρει στην αρχή της εγκυμοσύνης διαλογής PCR. Περάστε ανάλυση είναι απαραίτητη κατά την εγγραφή - έως και 12 εβδομάδες.

υλικό φράχτη προέρχεται από του τραχήλου της μήτρας με ειδικές βούρτσες. Η διαδικασία είναι ανώδυνη και δεν ενέχει κανέναν κίνδυνο για το βρέφος. Κανονικά κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης αναλύθηκαν για τη μέθοδο Chlamydia PCR, καθώς και ureaplasmosis, μυκοπλάσμωση, κυτταρομεγαλοϊό, έρπης, ιού θηλώματος. Τέτοια σύνθετη εξέταση που ονομάζεται PCR 6.

PCR για τη διάγνωση του HIV

Λόγω του γεγονότος ότι η μέθοδος της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης είναι πολύ ευαίσθητη στις αλλαγές στο σώμα και τις συνθήκες της διάγνωσης, πολλοί παράγοντες μπορούν να επηρεάσουν το αποτέλεσμα. Ως εκ τούτου, η ανάλυση της PCR για τον ιό HIV λοίμωξης δεν είναι μια αξιόπιστη μέθοδος, της αποτελεσματικότητας - 96-98%. Το υπόλοιπο 2-4% του τεστ δίνει ψευδώς θετικά αποτελέσματα.

Αλλά σε ορισμένες περιπτώσεις, χωρίς PCR διάγνωση του HIV δεν μπορεί να κάνει. Συνήθως, αυτό γίνεται σε άτομα με ψευδώς αρνητικό ELISA. Τα στοιχεία αυτά δείχνουν ότι το άτομο δεν έχει ακόμη αναπτύξει αντισώματα στον ιό και δεν μπορεί να ανιχνευθεί χωρίς αύξηση του αριθμού των πολλών. Το ότι αυτό μπορεί να επιτευχθεί με τη διεξαγωγή μιας μεθόδου εξέταση αίματος PCR.

Επίσης χρειάζεται είναι η διάγνωση των παιδιών πρώτο χρόνο της ζωής, που γεννήθηκαν από οροθετικές μητέρες. Η μέθοδος είναι ο μόνος τρόπος για να προσδιοριστεί με αξιοπιστία την κατάσταση του παιδιού.

PCR για τη διάγνωση της ηπατίτιδας

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης μέθοδος επιτρέπει την ανίχνευση του DNA του ιού της ηπατίτιδας Α, Β, C, πολύ πριν από το σχηματισμό αντισωμάτων έναντι της λοίμωξης ή σύμπτωμα εκδήλωση. Ιδιαίτερα αποτελεσματική είναι η ανάλυση των PCR για την ηπατίτιδα C, καθώς στο 85% των περιπτώσεων, η νόσος είναι ασυμπτωματική και χωρίς έγκαιρη θεραπεία γίνεται χρόνια.

Η έγκαιρη ανίχνευση του παθογόνου θα βοηθήσει στην αποφυγή επιπλοκών και μακροχρόνια θεραπεία.

διαλογή Ολοκληρωμένη PCR

Ολοκληρωμένη PCR Ανάλυση: τι είναι αυτό; Αυτή η αλυσιδωτή αντίδραση διαλογής μέθοδο polimezarnoy η οποία περιλαμβάνει τον προσδιορισμό ταυτόχρονα διάφορα λοίμωξη είδη: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, τριχομονάδες, κυτταρομεγαλοϊό, ουρεόπλασμα urealitikum, έρπητα 1ου και 2ου τύπου, γονόρροια ιού θηλώματος. Η τιμή αυτής της διάγνωσης κυμαίνεται από 2.000 έως 3.500 ρούβλια. ανάλογα με τις κλινικές, τα υλικά και τον εξοπλισμό, καθώς και από το είδος της ανάλυσης: ποιοτικές ή ποσοτικές. Αυτό που χρειάζεται στην περίπτωσή σας - ο γιατρός αποφασίζει. Σε ορισμένες περιπτώσεις, μπορείτε απλά να ανιχνεύσει την παρουσία του παθογόνου σε άλλα, όπως ο ιός HIV, το σημαντικό ρόλο που διαδραματίζει η ποσοτική τίτλο. αναφέρεται ως «ανάλυση PCR των 12» για τη διάγνωση όλων των ανωτέρω εξέταση παθογόνα.

Αποκρυπτογράφηση τα αποτελέσματα της ανάλυσης

ανάλυση Μεταγραφή PCR είναι απλή. Υπάρχουν μόνο 2 κλίμακας δείκτη - «αρνητικό» «θετική» και Κατά την ανίχνευση του παθογόνου μπορεί γιατρούς% εμπιστοσύνης 99 ου επιβεβαιώσει την παρουσία της νόσου και να αρχίσουν τη θεραπεία του ασθενούς. Στην ποσοτική μέθοδο προσδιορισμού μόλυνσης σε ένα αντίστοιχο αριθμό δείκτη στήλης ανιχνεύθηκαν βακτήρια θα προσδιορίζεται. Μόνο ένας γιατρός μπορεί να καθορίσει την έκταση της νόσου και να συνταγογραφήσει την απαραίτητη θεραπεία.

Σε ορισμένες περιπτώσεις, για παράδειγμα κατά τον προσδιορισμό μόλυνσης από HIV με PCR, με αρνητικό αποτέλεσμα, υπάρχει ανάγκη για πρόσθετες έρευνες για να επιβεβαιώσουν αυτά τα στοιχεία.

Πού να γίνεται η εξέταση;

Σε περίπτωση που περάσει-PCR ανάλυση στο δημόσιο κλινική ή ιδιωτικό εργαστήριο; Δυστυχώς, στο δημοτικό ιατρικά ιδρύματα εξοπλισμό και τις μεθόδους που συχνά ξεπερασμένα. Ως εκ τούτου, είναι καλύτερο να δοθεί προτεραιότητα σε ιδιωτικά εργαστήρια με σύγχρονο εξοπλισμό και εξειδικευμένο προσωπικό. Επιπλέον, σε μια ιδιωτική κλινική θα έχετε τα αποτελέσματα πολύ πιο γρήγορα.

Στη Μόσχα, πολλά ιδιωτικά εργαστήρια προσφέρουν ανάλυση PCR για διάφορες λοιμώξεις. Για παράδειγμα, σε αυτές τις κλινικές ως «Vita», «Ολοκληρωμένη Κλινική,» «Happy Family», «ουρο-Pro», πραγματοποιείται ανάλυση PCR. Τιμή έρευνα είναι 200 ρούβλια. για τον καθορισμό ενός παθογόνου.

Μπορεί να εξαχθεί το συμπέρασμα ότι η διάγνωση μολυσματικών ασθενειών με PCR στις περισσότερες περιπτώσεις είναι ένας γρήγορος και αξιόπιστος τρόπος ανίχνευσης της παθογόνου στο σώμα, στα πρώιμα στάδια της λοίμωξης. Ωστόσο, σε ορισμένες περιπτώσεις, να επιλέγουν άλλες μεθόδους διάγνωσης. Καθορίστε την ανάγκη για μια τέτοια μελέτη μπορεί να είναι μόνο ένας ειδικός. Η αποκρυπτογράφηση της PCR ανάλυση απαιτεί επίσης μια επαγγελματική προσέγγιση. Ακολουθήστε τις συμβουλές του γιατρού σας και δεν δίνουν τις δικές τους δοκιμές, οι οποίες δεν είναι απαραίτητες.